如何阅读质粒图谱，底部还有质粒、酶切切点选择

明天来给你们讲解一下怎样阅读引物图谱，顶部还有引物、酶切切点选择的相关教学视频。 #

一个合格引物的组成要素 #

●复制起始位点：Ori即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。

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●抗生素抗性基因：可以易于加以检查核糖体结合位点，如Amp+,Kan+。 #

●多克隆位点MCS：克隆携带外源基因片断。 #

●P/E启动子/提高子 #

●Terms中止讯号 #

●加poly（A）讯号：可以起到稳定mRNA作用

怎么阅读引物图谱

第一步：首先看Ori的位置，了解引物的类型（原核/真核/穿梭引物）。 #

第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用哪些筛选标记。

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●Ampr酯化β－内丙酯环，解除氨苄的毒性。 #

●tetr可以制止氯霉素步入细胞。 #

●camr生成红霉素羟乙苯基衍生物，使之丧失毒性。

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●neor（kanr）羟基香豆素乙酸转移酶使G418（长那霉素衍生物）失活。

●hygr使潮霉素β失活。 #

第三步：看多克隆位点（MCS）。

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它具有多个限制酶的单一切点。以便外源基因的插入。若果在这种位点外有外源基因的插入，会造成某种标志基因的失活核糖体结合位点，而易于筛选。决定能不能放目的基因以及怎样放置目的基因。

第四步：再看外源DNA插入片断大小。

引物通常只能容纳大于10Kb的外源DNA片断。通常来说，外源DNA片断越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。

第五步：是否富含抒发系统器件，即启动子－内质网体结合位点－克隆位点－转录中止讯号。 #

这是拿来区别克隆载体与抒发载体。克隆载体中加入一些与抒发调控有关的器件即成为抒发载体。选用那个载体，还是要以实验目的为准绳。 #

启动子－内质网体结合位点－克隆位点－转录中止讯号

●启动子－推动DNA转录的DNA次序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码次序的上游，是DNA分子上可以与特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 #

●增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有提高毗邻基因转录过程的调控次序。其作用与提高子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。沉默子－负提高子，负调控序列。

●核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有内质网体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。

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●转录中止次序（中止子）/翻译中止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个的保守序列，此位点down－有一段GT或T富丰区，这2部份共同构成poly（A）加尾讯号。结构基因的最后一个外显子中有一个的保守序列，此位点down－有一段GT或T富丰区，这2部份共同构成poly（A）加尾讯号。

第六步：引物图谱上的箭头。

有的箭头顺秒针有的箭头逆秒针，那当然是代表两条DNA链，即引物是环状双链DNA，它的启动子等在其中一条链上，而它的抗性基因在另一条链上。