深圳51836目的评价酶联免疫荧光法与电化学发光法
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,本科,副主任技师,主要从事医学检验研究,欧嘉文(北京大学深圳医院检验科,广东深圳518036)目的评价酶联免疫荧光法与电化学发光法用以定量检测降钙素原(PCT)的分析性能,并探讨两种方法检测结果的相关性和一致性,为合理选择PCT的检测系统提供依据。方法酶联免疫荧光法采用miniVI‐DAS全自动荧光免疫分析仪(简称miniVIDAS),电化学发光法采用CobasE411电化学发光分析仪(简称CobasE411)测定相应配套低、高值质控品,计算日内和日间精密度;测定相应试剂非同批号的定值标准品观察偏倚程,分析和比较两种方法检测结果的相关性和一致性。结果miniVIDAS检测PCT低值和高值质控品的日内精密度分别为2.02%.83%,日间精密度分别为.09%;CobasE411检测的日内精密度分别为.87%,日间精密度分别为miniVIDAS检测PCT低值和高值定值标准品的偏倚分别为.97%;CobasE411的偏倚分别为5.26%两种方法的PCT检测结果比较差异有统计学意义.01),但两者的相关性(r.76)良好。结论两种方法定量检测PCT的分析性能都能满足实验室要求,且具有良好的相关性和一致性,实验室可根据实际情况选择合适的检测系统。 #
【关键词】一致性DOI:10.3969/j.issn.1672‐9455.2015.06.024文献标志码文章编号:1672‐9455(2015)06‐0780‐03EvaluationquantitativedetectionWUJin‐bin,ZHENGRuo‐yang,OUJia‐wen(De‐aboratory,PekingUniversityShenzhenHospital,Shenzhen,Guangdong518036,China)【Abstract】Toevaluateanalyticalperformancetwomethodsenzyme‐linkedimmunoassayelectrochemiluminesceneimmunoassayquantitativelydetectingprocalcitonin(PCT)correla‐tiontestresultsreasonablechoicePCTdetectionsys‐tem.MethodsTheenzyme‐linkedimmunoassayadoptedminiVIDASautomaticfluorescenceimmunoassayanaly‐zerelectrochemiluminesceneimmunoassayadoptedCobasE411electrochemiluminesceneimmunoassayalyzer.Thecorrespondingmatchinglowhighvaluesqualitycontrolmaterialsweredetectedintra‐dayprecisioninter‐dayprecisionnon‐samebatchnumberfixedvaluestandardmaterialcor‐respondingreagentbiasdegreesdetectionre‐sultswereanalyzedcomparedbetweentwokindsmethod.ResultsTheintra‐dayprecisionshighvaluesqualitycontrolmaterialsmeasuredminiVIDASfluorescenceimmunoassayanalyzerwereinter‐dayprecisionswerebiasesweretra‐dayprecisionsPCTmeasuredCobasE411ECLanalyzerwereinter‐daypreci‐sionswerebiaseswere.90%.Thedetectionresultstwomethodshadstatisticallysignificantdifferencesgoodcorrelationgoodconsistency(Kappa.76).ConclusionTheanalyticalperformancetwokindsquantitativePCTdetectionmethodcouldmeetgoodcorrelationgoodconsistency.Laboratorycouldselectproperdetectionsystemaccordingactualsituation【Keywords】enzyme‐linkedfluorescentassayelectrochemiluminescencemethodquantita‐tiveperformanceanalysisPCT检测为临床感染性疾病的诊断、治疗和预后评估,以及抗菌药物的合理使用等方面提供了非常有意义的参考信息检测项目已被广泛应用于急诊检验中。
目前,PCT精确定量的检测方法主要有酶联免疫荧光法和电化学发光法。本研究参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的EP15‐A2EP9‐A2文件要求,对本院检验科两个PCT检测系统的精密度、准确度及检测结果的相关性和一致性进行比较和分析为选择更合适的检测方法提供参考信息。现报道如下。标本来源309份标本均来自于2014月本院门诊、急诊和住院患者,其中男18324)岁。所选研究对象包括各年龄段人群,且各年龄层均包含一定数量的男、女性研究对象,包含一定数量的健康人群及轻、中、重度炎症人群。剔除溶血、黄疸和脂血标本。检测方法酶联免疫荧光法采用生物梅里埃miniVI‐DAS全自动荧光免疫分析仪(以下简称miniVIDAS)及其配套试剂、定标液与质控品(法国生物梅里埃股份有限公司)剂批号140904‐0;电化学发光法采用罗氏CobasE411电化学发光分析仪(以下简称CobasE411)及其配套试剂、定标液与质控品(德国罗氏诊断有限公司),试剂批号173339‐03检验医学与临床2015LabMedClin,March2015,Vol.12,No品均溯源于德国BRAHMSPCTLIA严格按照仪器、试剂说明书和标准操作规程进行操作,每日在室内质控均在控的情况下采用两个检测系统平行检测标本,记录检测结果。 #
日内和日间精密度测定日内精密度检测配套低值质控品20,计算均值(x)、标准差(s)和变异系数(CV),并与试剂说明书的相应标示值比较和CV,并与试剂说明书的相应标示值比较。准确度验证测定各检测系统不同批号的定值标准品 (Mini VIDAS 定值标准品的批号为130703 ,Cobas E411 标准品的批号为173266) ,计算测定值与标准品定值的偏倚 由于目前在各规范性文件中尚未提及PCT 的生物学变异和分 析质量要求 ,本研究参考肿瘤标志物检测项目的验证标准设定 PCT 的可接受偏倚为小于 10% 相关性分析选取两组检测结果都在线性范围内的标 ,以CobasE411 检测结果为X ,mini VIDAS 检测结果为 根据PCT 测定浓度的不同 ,PCT 急诊 临床应用专家共识中将 PCT 检测结果的判读分为 .05ng /mL 为正常范围 .50ng/mL 为轻度全 身炎性反应 .00ng /mL 为中度全身炎性反应、2 .01 10.00 ng /mL 为可能为脓毒血症 ng/mL 为严重脓毒 ,依据此分类标准将两组检测结果分别分成5组进行一致 性比较。 统计学处理采用SPSS20 统计学软件进行数据处理与统计学分析 ,计量资料以 表示,组间比较采用 计数资料以百分率表示;两检测系统检测结果的相关性分析采 Pearson相关性分析 ;两检测系统检测结果的一致性分析采 Kappa检验 ,Kappa 值不低于0 .75 说明一致性较好。
两检测系统的日内和日间精密度测定结果两个检测系 统的日内、日间精密度均小于各自厂家说明书标示的相应接近 浓度水平的 CV ,与厂家声明相符合。 见表1 两检测系统的日内精密度项目 mini VIDAS 测定 ,ng/mL) CV(% miniVIDAS 标示 ,ng/mL) CV(% CobasE411 测定 ,ng/mL) CV(% CobasE411 标示 ,ng/mL) CV(% .8324 .8710 两检测系统的日间精密度项目 mini VIDAS 测定 ,ng/mL) CV(% miniVIDAS 标示 ,ng/mL) CV(% CobasE411 测定 ,ng/mL) CV(% CobasE411 标示 ,ng/mL) CV(% .0924 .0610 两检测系统的准确度验证结果mini VIDAS 检测 PCT 低值与高值的偏倚分别为2 .98% .97%,Cobas E411 测PCT低值与高值的偏倚分别为5 .26% .90%,均小于 10% ,两个检测系统的偏倚均在临床检验可接受范围内。 两检测系统的准确度验证结果项目 Mini VIDAS 标定值 (ng /mL) 测定值 (ng /mL) 偏倚 CobasE411 标定值(ng /mL) 测定值 (ng /mL) 偏倚 .8052 .9752 .4052 两检测系统的相关性分析mini VIDAS 检测线性范围 200ng /mL ,Cobas E411 检测线性范围为0 .02 100ng /mL ,共244 份标本的两组检测结果均在线性范围(0 .05 100ng /mL)内 ,两组检测结果比较差异有统计学意义(P< .01),但两组检测结果相关性良好(Y 一致性分析显示,Kappa .76(Kappa值不低于0 .75) ,两检测系统检测结果的一 致性较好。 #
miniVIDAS 和Cobas E411 检测结果的相关性分析 两检测系统的一致性分析mini VIDAS (ng/mL) Cobas E411(ng/mL) 10.00 .00合计 .0521 10.00 合计21 LabMed Clin ,March 2015 ,Vol .12 ,No PCT作为现阶段用于诊断感染和脓毒血症的较理想指标 ,尤其在鉴别诊断发热患者是否存在感染 ,以及危重患者的体征监测中应用广 严重的细菌感染会导致PCT一过性升高 ,其中细菌内毒 素为关键的诱导因素 ;脓毒血症及多脏器衰竭同样会出现 PCT 一过性升高 ,但PCT 水平通常低于伴有细菌性病灶的患者。 ,肠道释放的细胞因子或细菌移位可能诱导PCT 水平的升 ,其升高程度反映机体炎性反应的活跃程度,与患者的病情相 定量检测PCT有助于临床对感染性疾病的早期诊断 本研究两个检测系统测定PCT 的原理不同。 通过验证和 分析比较显示 ,二者均具有较好的精密度和准确度 ,可满足实 验室和临床的质量要求 ;两检测系统的检测结果具有较好的相 采用相同的临界值(Cutoff 两组检测结果均在线性范围内的标本进行分组,一致性分析显 示两检测系统的测定结果具有较好的一致性(Kappa 由于方法学原理的差异,两个系统的检测灵敏度和检 测范围有所不同。 #
Cobas E411 的最低检测限为0 .02 ng /mL 检测灵敏度略高于miniVIDAS(0 .05 ng /mL) ;且mini VIDAS 的检测范围(0 .05 200ng /mL CobasE411 100ng /mL)更宽。 但在试剂说明书中 mini VIDAS 标明其检测 PCT 的功能灵敏度为0 .09 ng /mL ,大于200 ng /mL 的标本可 进行10 倍稀释 ;Cobas E411 检测 PCT 的功能灵敏度为 .06ng /mL ,大于100 ng /mL 的标本可进行4 倍稀释。 因此 ,需要 对两检测系统的功能灵敏度和最大稀释倍数或可报告范围作 进一步的验证。 两检测仪器均使用了一次性加样吸头和独立的反应杯 此均有效地避免了携带污染。在操作程序上 ,mini VIDAS 疫荧光分析仪需人工加样,手动编号 ,标本仓中一次可同时加 入12 个标本测试条 ,单个样品检测时间为20 min ,适用于标本 量不大的中小型实验室。 Cobas E411 电化学发光分析仪可实 现与实验室信息系统的双向通信 ,进行全自动检测 ,单个样品 检测时间为18 min ,标本盘中有30 个测试位定量评估的方法,可在不停机的状 态下连续加样检测 ,考虑到检测效率和高通量标本检测试剂成 本相对较低等因素 [10] ,该仪器更适用于中心化实验室大标本 量的检测。 #
但是 ,就实验成本而言 ,电化学发光法的成本较高 其中自动化程度较高的方法因仪器故障出现的试剂浪费也是需要考虑的问题之一。 综上所述 ,两种检测系统均有较好的精密度和准确度 相关性、一致性良好,临床实验室应根据自身的需求做相应的 选择。 参考文献 ,etal .Can emergen‐ cy physicians identify highmortality subgroup pa‐tients sepsis:role .EurEmerg Med ,2008定量评估的方法,15(1) :26‐33 NationalCommittee Clinicallaboratory Standants .Us‐ er demonstration accura‐cy EP15‐A2[S] .Wayne ,USA :NCCLS ,2004 NationalCommittee Clinicallaboratory Standants .EP9‐ A2 :Method comparison biasestimation using patient samples ,approved guideline[M] .2nd .Wayne :NCCLS ,2002 降钙素原急诊临床应用专家共识组.降钙素原(PCT 诊临床应用的专家共识[J].中华急诊医学杂志 ,2012 ,21 华急诊医学杂志,2010 ,19(5) :556‐558 .应用降钙素原在诊断重症监护病房患者中菌血症的价值[J] .中华急诊医学杂志 ,2014 23(4):381‐383 .中国公共卫生杂志,2012 ,28(11) :1537‐5139 .血清降钙素原定量检测与血培养结果的比较[J .中华检验医学杂志,2012 ,35 .中国医疗机构医院感染暴发应急现状调查[J] .中国公共卫生杂志 ,2013 ,29(2) :191‐ 194 .中国公共卫生杂志,2013 ,29(9) :1397‐1398 (收稿日期:2014‐08‐22 修回日期:2014‐11‐22) (上接第779 p16四联检测在宫颈原发腺癌和子宫内膜癌诊 断和鉴别中的应用[J] .南方医科大学学报 ,2010 ,30(3) ,卢文生,黄家财 .TCT 联合 HPV 及肿瘤标志物 检测在宫颈癌中的意义[J] .检验医学与临床 ,2012 (10):1213‐1214 .原发性宫颈腺癌组织中hr‐HPV DNA P16蛋白的表达[J] .武汉大学学报 :医学版 ,2011 32(3):365‐368 .免疫组化标记物在子宫内膜样腺癌与宫颈腺癌鉴别诊断中的表达及意义[J] .中国肿 瘤临床与康复 ,2014 ,21(1) :45‐48 ,ZainoRJ .Problematic issues endometrial,cervical vulvalcarcinomas .Histopathology,2013 ,62(1) :176‐202 .子宫内膜样腺癌MUC1 表达 及其与ER 、PR 表达的相关性[J] .临床与实验病理学杂 ,2013,29(5) :497‐501 KimCH ,Soslow RA ,Park KJ ,et al .Pathologic ultrastag‐ ing improves micrometastasis detection sentinellymph nodes during endometrial cancer staging[J] .Int GynecolCancer ,2013 ,23(5) :964‐970 .血清3项检测对子宫肌瘤合 并子宫内膜癌患者的术前诊断价值[J] .检验医学与临 ,2014,11(6) :809‐810 ER、PR 在子宫内膜样 腺癌中的表达及临床意义[J] .实用医学杂志 ,2012 ,28 .宫颈腺癌发生相关蛋白的蛋白质组学初步研究[J] .现代生物医学进展 ,2013 ,13(28) (收稿日期:2014‐09‐12 修回日期:2014‐12‐18) 检验医学与临床2015 LabMed Clin ,March 2015 ,Vol .12 ,No #