中药血浆药理学方法与DCS有效成分差异,为建立并研究依据

【摘要】：一、目的从给药剂量、给药时间、采血时间、抗凝剂选择、供体选择、保存条件等方面比较草药DCP与DCS有效成份差别,为确立并建立草药血清毒理学方式提供研究根据。二、方法1.选用HPLC、HPLC-MS等方式测量不同给药剂量、给药时间及采血时间当归、补阳还五汤小鼠DCP和DCS中有效成份的浓度；测量沙参、调胃承气汤小鼠不同抗凝剂DCP和DCS有效成份浓度和离子硬度；测量小鼠柴胡不同保存条件DCP和DCS中有效成份浓度；测量小鼠、兔、猴三种不同供体来源的灵芝、四君子汤DCP中有效成份浓度。2.选用2-DE-MS技术进行黄芩汤含药血清和血浆蛋白质(肽)组学比较。3.选用渗透压摩尔含量法和电位法测量沙参、水蛭、朱砂、四物汤DCP和DCS加入到DMEM培养液后渗透压和PH值的变化。三、结果1.给药剂量、时间和采血时间的影响柴胡DCP与DCS比较：高药量组DCP当归苷峰含量时间点及含量为：第3天药后1h,含量为(5.48±2.51)ug/ml；高药量组DCS当归苷峰含量时间点及含量为：第5天药后1h,含量为(5.47±2.17)ug/ml。低药量DCP当归苷峰含量时间点及含量为：第5天药后1h,含量为(5.27±2.13)ug/ml;低药量DCS当归苷峰含量时间点及含量为：第5天药后1h,含量为(5.21±2.18)ug/ml。

#

益气还五汤DCP与DCS比较：高药量组DCP肉豆蔻酸峰含量时间点及含量为：第3天药后1h,含量为(0.386±0.121)ug/ml;高药量组DCS肉豆蔻酸峰含量时间点及含量为：第3天药后1h,含量为(0.384±0.116)ug/ml。低药量DCP肉豆蔻酸峰含量时间点及含量为：第3天药后1h,含量为(0.383±0.127)ug/ml；低药量DCS肉豆蔻酸峰含量时间点及含量为：第3天药后1h,含量为(0.380±0.115)ug/ml。2.抗凝剂选择的影响黄芩不同抗凝剂尿样黄芩碱浓度从高至低为：DCP(地塞米松)DCP(EDTA)DCS(不抗凝)DCP(枸橼酸),调胃承气汤不同抗凝剂尿样大黄酸浓度从高至低为：DCP(地塞米松)DCS(不抗凝)DCP(EDTA)DCP(枸橼酸)。组间统计比较,黄芩碱、大黄酸浓度差别无统计学意义(P0.05)。与空白组比较,黄芩组DCS和DCP离子硬度均明显性增加(P0.01)；调胃承气汤组地塞米松、EDTA抗凝血清离子硬度均明显性增加(P0.01)。组内与血浆比较,血清离子硬度均下降,其中枸橼酸抗凝血清离子硬度明显下降(P0.01)。3.保存条件与时间的影响与A组(不保存)比较,保存30d后,-20℃保存条件下的DCS和DCP中胡椒酸降低率为(12.9%,13.2%),-80℃保存条件下的DCS和DCP胡椒酸含量降低率为(11.4%,11.9%)血浆与血清的区别,差距均无统计学意义(P0.05)；保存60d后,-20℃保存条件下的DCS和DCP中胡椒酸降低率为(18.0%,17.8%),-80℃保存条件下的DCS和DCP中胡椒酸降低率为(14.8%,13.3%),胡椒酸浓度有所增加,但差距均无统计学意义(P0.05)；保存180d后,-20℃保存条件下的DCS和DCP中胡椒酸降低率为(39.9%,38.3%),-80℃保存条件下的DCS和DCP中胡椒酸降低率为(33.2%,32.6%),其中-20℃C保存条件下的DCS和DCP中胡椒酸浓度增加差别具备统计学意义(P0.05);-80℃保存的DCS和DCP中胡椒酸浓度增加不显著,无统计学意义(P0.05)。

#

4,血清供体选择的影响党参主要有效成份在不同植物供体DCP浓度的高低依次为：鸡狗小鼠。四君子汤主要有效成份在不同植物供体DCP浓度的高低依次为：鸡狗小鼠。三种不同供体草药有效成份浓度存在一定差距,但无明显性(P0.05)。5.血清与血浆蛋白组学比较与BP比较,DCP共辨识到32个差别蛋白点,其中26个差别点抒发下调,6个差别点抒发上调；与BS比较,乌头汤DCS共辨识到18个差别蛋白点,其中14个差别点抒发下调,4个差别点抒发上调；与DCS比较,乌头汤DCP共辨识到26个差别蛋白点,其中18个差别点抒发下调,8个差别点抒发上调；消除纤维蛋白原血清前后比较,黄芩汤DCP共辨识到24个差别蛋白点,其中20个差别点抒发下调,4个差别点抒发上调。成功鉴别流血浆与血浆中7个高抒发差距蛋白,分别为a-1-AT、ApoE、ApoA-l、γ-FIB、HP、FPA和ABC。6.血清对体外试验机制的影响随着培养时间的延长,各组别的培养液的渗透压和PH值随之降低,但与同时期的对照组比较,加入含药血浆与含药血清培养液的渗透压和PH值,二者之间差别不具备明显性(P0.05)。 #

同时期相似抗生素和药量的含药血清与含药血浆培养液的渗透压和PH值,二者之间差别不具备明显性(P0.05)。四、结论1.黄芩汤含药血清蛋白组学结果比含药血浆更接近尿液真实值,提示以含药血清进行草药半体内试验。2.柴胡和益气还五汤有效成份前胡苷和肉豆蔻酸在小鼠血清和血浆中存在差别,纯化草药含药血清选用2倍量以上临床等效药量,连续肌注给药3天以上血浆与血清的区别,最后一次给药后lh取血为宜。3.应用不同抗凝剂纯化的五味子、调胃承气汤含药血清和含药血浆中有效成份存在差别,但离子硬度基本一致,纯化草药含药血清推荐使用地塞米松抗凝,尽量避开使用枸橼酸抗凝。如地塞米松对试验结果有干扰再考虑其它抗凝剂。4.柴胡含药血清和含药血浆中胡椒酸含量与保存时间和保存体温有关,含药血清的保存条件推荐-20℃冰冻保存不少于60天或-80℃超高温保存不少于180天。5.从小鼠、兔、猴三种植物中纯化的含何首乌和四君子汤的血清和血浆有效成份浓度无差别,供体的选择无特殊要求,建议依照来源相似原则。基于小鼠品质靠谱,使用广泛,操作便利,可以考虑血清供体首选小鼠。6.乌头、水蛭、朱砂、四物汤含药血清、含药血浆对DMEM培养液的渗透压和PH值的影响差别无明显性。

#